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乙腦病毒IgM檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

預(yù)期用途

乙腦病毒IgM檢測(cè) ELISA試劑盒可用于人血清中抗重組抗原（來(lái)源于JEV）的IgM抗體的檢測(cè)。這一檢測(cè)有助于人是否感染了JEV的診斷。此試劑盒并不用于血液或血液成分的篩查，且該試劑盒尚未針對(duì)疫喵誘導(dǎo)的血清轉(zhuǎn)化研究進(jìn)行優(yōu)化，因而僅供專業(yè)人士和體外診斷用。

檢測(cè)原理

JE檢測(cè)MAC-ELISA由一種酶促擴(kuò)增的“兩步"夾心式免疫測(cè)定法組成。在測(cè)試中，JE陰性質(zhì)控，陽(yáng)性質(zhì)控和使用樣本稀釋液稀釋的未知樣本首先加入到包被有抗人IgM的微孔板上進(jìn)行溫育，洗板之后分別與JEV衍生的重組抗原（JERA）和正常細(xì)胞抗原（NCA）一起溫育。再次洗板后加入HRP標(biāo)記的抗乙腦抗體。洗板，加入TMB作為顯色劑，一段時(shí)間后加入硫酸以終止底物反應(yīng)。所形成的顏色深度與樣本中的特異性抗體成正比。當(dāng)吸光度高于一定值時(shí)，JERA和質(zhì)控品的吸光率可準(zhǔn)確地測(cè)定JEV抗體是否存在。

試劑盒組成成分
乙腦病毒IgM檢測(cè) ELISA試劑盒包含了足夠用于96孔的試劑。此試劑盒包含的成分有：
JE IgM檢測(cè)用的特定材料：

■JEV人IgM檢測(cè)用微孔板：包被有抗人IgM抗體的96孔聚苯乙稀微孔板，在2-8℃下儲(chǔ)存?zhèn)溆?，包被了抗人IgM的微孔可用來(lái)捕獲人樣品中的IgM抗體。

■IgM樣品稀釋液：25ml ，1瓶，2-8℃下貯存，即用。
注意：如果稀釋液出現(xiàn)沉淀，先旋渦混合再使用。

■JE IgM 陽(yáng)性質(zhì)控：1支50μl熱滅活滅活血清。JE IgM陽(yáng)性質(zhì)控用于輔助監(jiān)測(cè)試劑的完整性。2-8℃下儲(chǔ)存至使用。在使用前短暫地迅速搖勻試劑，以收集瓶底的成分。

■JE陰性質(zhì)控：1支50μl熱滅活血清，JE陰性質(zhì)控用于輔助監(jiān)測(cè)試劑的完整性，2-8℃下儲(chǔ)存至使用。在使用前短暫地迅速搖勻試劑，以收集瓶底的成分。

注意：若需長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存（＞1周）血清應(yīng)分裝儲(chǔ)存在-70℃或-20℃。

■JE抗原（JERA）：1支，3ml即用型的JERA，2-8℃下貯存，即用

■正常細(xì)胞抗原（NCA）：1支，3ml即用型的JERA，2-8℃下貯存，即用

■10X的洗滌液：1瓶120ml，在整個(gè)過(guò)程的洗板步驟中120mL的洗滌液將被使用，在2-8℃下儲(chǔ)存。

■Enwash:1瓶，20ml，Enwash在加酶聯(lián)物后的洗板程序之間使用，在2-8℃下貯存?zhèn)溆谩?/span>

■用于JE IgM檢測(cè)的即用型 HRP酶標(biāo)物：1瓶, 6ml，內(nèi)含預(yù)稀釋好的HRP黃熱病毒活性單克隆抗體，在2-8℃下貯存?zhèn)溆谩?br/>注意該試劑任何時(shí)候都應(yīng)該在避光條件下保存。

■TMB底物液： 1瓶，9ml，在2-8℃下貯存?zhèn)溆谩?/span>

注意：底物液應(yīng)時(shí)刻存放于試劑盒所提供的避光瓶里。
■ 終止液：1瓶6ml，用來(lái)終止酶反應(yīng)，2-8℃下貯存?zhèn)溆谩?br/>警告：強(qiáng)酸；穿保護(hù)手套、面罩和戴安全眼鏡，棄置所有材料均應(yīng)按照安全條例與規(guī)則進(jìn)行。

檢測(cè)所需材料（試劑盒內(nèi)未提供）

試劑盒檢測(cè)步驟

1.陽(yáng)性質(zhì)控，陰性質(zhì)控應(yīng)在乙腦重組抗原和正常細(xì)胞抗原試驗(yàn)中做雙孔檢測(cè)。未知樣本可以做單孔或雙孔檢測(cè)，但乙腦重組抗原和正常細(xì)胞抗原試驗(yàn)中都必須檢測(cè)，一個(gè)96孔板多可檢測(cè)44個(gè)樣本，具體可參考本節(jié)末尾的流程圖。

2、標(biāo)記好試驗(yàn)所需包被板

3、用所提供的樣品稀釋液將待測(cè)血清和質(zhì)控稀釋至1/100，用小聚苯乙烯軟管完成稀釋。至少使用4ul的血清樣品，陰性、陽(yáng)性質(zhì)控。例如4µl的血清加入396µl的樣品稀釋液配制出1/100的稀釋液。

4、用多頭或單頭的移液管將稀釋的樣品，陰性質(zhì)控，陽(yáng)性質(zhì)控各50ul加入相應(yīng)的微孔中，以下加入44份測(cè)試血清的范例

5、 用封板膠僅在開(kāi)放的微孔表面封板，所有板條的底部是不需要覆蓋的。
注意：這樣是為了保證溫度均勻的分布在每個(gè)孔的底部和邊緣。一旦頂部密封阻礙了蒸發(fā)，任何多余的封板膠必需被剪掉。
6. 37℃下保濕溫育板條1小時(shí)。
注意：不要將微孔板板條的頂部疊起，必須單獨(dú)地分層平輔。這對(duì)于溫度的平等分布非常重要。不要使用CO2或任何氣體，不要讓板條接觸任何濕潤(rùn)的物質(zhì)，如濕紙巾等。詳見(jiàn)英文說(shuō)明書(shū)。

7.孵育后，使用自動(dòng)洗板機(jī)用1X 的洗滌緩沖液洗板6次，每孔300ul

8.用多頭的移液器在A-D列加入50ul的乙腦重組抗原，E-H列加入50ul的正常細(xì)胞抗原；以下為加入JERA和NCA的應(yīng)用范例：

9.用封板膠僅在開(kāi)放的微孔表面封板，所以板條的底部是沒(méi)有覆蓋的。

10.在孵育器中37℃下溫育板條1小時(shí)

11.在溫育后，用自動(dòng)洗板機(jī)洗板6次，每次洗板時(shí)每孔使用300µl的洗滌液

12.用多頭的移液器每孔加入50µl的HRP標(biāo)記的酶聯(lián)物

13用封板膠僅在開(kāi)放的微孔表面封板，所以板條的底部是沒(méi)有覆蓋

14.在37℃下避光溫育板條1小時(shí)

15.溫育后，使用洗板液，用自動(dòng)洗板機(jī)洗板6次。

16.用頭多的移液器在每孔中加入150µl的Enwash

17.不用封板，在室溫下溫育5分鐘

18.在溫育后，使用1X的洗板液，用自動(dòng)洗板機(jī)洗板6次

19.用多頭的移液管每孔加入75µl的液態(tài)TMB底物液。

20.不用封板，將微孔板在室溫下避光靜置10分鐘。

21.用多頭的移液管在每孔中加入50µl的終止液，不用封板，在室溫下孵育1min。

22.用酶標(biāo)儀在450nm處讀取OD值， 請(qǐng)確保酶標(biāo)儀不會(huì)減去或標(biāo)準(zhǔn)化任何空白值或孔。

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