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大鼠IFN-γ檢測(cè)試劑盒（ELISA）

elisa操作終止及讀板過(guò)程常見(jiàn)問(wèn)題及解答：

1. 終止液加樣時(shí)產(chǎn)生氣泡；

2. 終止不均勻

3. 酶標(biāo)板板底臟污

4. 讀數(shù)波長(zhǎng)錯(cuò)誤，

5. 終止液加入后，長(zhǎng)時(shí)間不讀板

解決辦法：

1. 加終止液時(shí)，應(yīng)避免起泡，以免造成假陽(yáng)性

2. 終止液加入后應(yīng)輕輕振板，使終止液與板孔內(nèi)溶液充分混勻；

3. 酶標(biāo)板讀數(shù)前，應(yīng)輕輕拭去板底的水跡和污物，保證板底干潔，以免影響讀數(shù)；

4. 應(yīng)根據(jù)底物液選擇合適的讀數(shù)波長(zhǎng)，如TMB一般選擇450nm波長(zhǎng)，PNPP一般選擇405nm波長(zhǎng)等；

加入終止液后，應(yīng)盡快讀板，酶標(biāo)板內(nèi)顏色會(huì)隨著終止時(shí)間的延長(zhǎng)而變淡，因此，*是在終止后10分鐘內(nèi)讀板。

通用名稱：大鼠IFN-γ檢測(cè)試劑盒（ELISA法）
英文名稱：RayBio® Rat IFN-gamma ELISA Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：ELR-IFN-γ
產(chǎn)品規(guī)格：96T
檢測(cè)樣本：血清、血漿、細(xì)胞上清液
公司品牌：美國(guó)RayBio
儲(chǔ)存條件：-20℃
檢測(cè)方法：ELISA方法
預(yù)期用途：定量測(cè)定大鼠血清、血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IFN-γ的含量
參考價(jià)格：詢價(jià)
供應(yīng)商家：深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司

大鼠IFN-γELISA試劑盒預(yù)期用途

RayBio®大鼠IFN-γ細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒采用體外酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法，定量測(cè)定大鼠血清（正常血清和血漿中的大鼠IFN-γ濃度低，在該測(cè)定中可能無(wú)法檢測(cè)到），血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IFN-γ的含量。

大鼠IFN-γELISA試劑盒檢測(cè)原理

大鼠IFN-γ檢測(cè)試劑盒使用包被有IFN-γ特異性抗體的96孔酶標(biāo)板，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品被加入到孔中，樣品中存在的IFN-γ通過(guò)固相的抗體與孔結(jié)合。洗滌后加入生物素化的抗大鼠IFN-γ抗體。 洗去未結(jié)合的生物素化抗體后，將HRP-標(biāo)記的鏈霉素加入到到孔中。 再次洗滌板孔，向孔中加入TMB底物溶液，底物顯色與所結(jié)合的IFN-γ量成比例。 加入終止液顏色從藍(lán)色變?yōu)辄S色，并且在450nm處測(cè)量顏色的吸光度值。

大鼠IFN-γ檢測(cè)試劑盒組成成分
●IFN-γ酶標(biāo)板（項(xiàng)目A）——12*8=96孔，包被有抗人IFN-γ抗體——4℃ 1個(gè)月
●濃縮洗滌液（20x）（項(xiàng)目B）——20x濃縮溶液 25ml ——4℃ 1個(gè)月
●標(biāo)準(zhǔn)蛋白（項(xiàng)目C）——2瓶人類IFN-γ。1個(gè)小瓶就夠配制每個(gè)一式兩份的標(biāo)準(zhǔn)品。——-80℃1個(gè)月
●檢測(cè)抗體IFN-γ（項(xiàng)目F）——2瓶生物素化的抗大鼠IFN-γ。
●每個(gè)小瓶足以測(cè)定微板的一半?！?℃ 5天
●濃縮HRP-鏈霉親和素（項(xiàng)目G）——200μl 200X濃縮HRP綴合鏈霉親和素——不能保存和重新使用
●一步法TMB底物（項(xiàng)目H）——TMB溶液12ml ——N/A
●終止液（項(xiàng)目I）——8ml 0.2M硫酸——N/A
●測(cè)定稀釋劑A（項(xiàng)目D）——30ml稀釋緩沖液，0.09％Sodium azide防腐劑?！狽/A
●測(cè)定稀釋劑B（項(xiàng)目E）——15ml 5X濃縮液——4℃ 1個(gè)月

大鼠IFN-γ檢測(cè)所需材料（試劑盒內(nèi)不提供）
●能夠測(cè)量450 nm處吸光度的酶標(biāo)儀。
●提供2μl至1 ml體積的精密移液管。
●可調(diào)1-25毫升移液器用于試劑制備。
●100毫升和1升刻度量筒。
● 吸水紙。
● 蒸餾水或去離子水。
●雙對(duì)數(shù)做圖紙或計(jì)算機(jī)和軟件進(jìn)行ELISA數(shù)據(jù)分析。
●準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品或樣品稀釋液的管子。

大鼠IFN-γ檢測(cè)試劑盒檢測(cè)步驟

●使用前將所有試劑和樣品置于室溫（18 - 25oC）。建議所有標(biāo)準(zhǔn)和樣品至少重復(fù)一次。
●根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)標(biāo)記可拆卸的8孔條。
●分別加入樣品和每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品100μl（參見(jiàn)試劑制備步驟3）到適當(dāng)?shù)陌蹇字小Ｉw上蓋子，室溫溫和振蕩孵育2.5小時(shí)
●棄去溶液，用1X洗滌液洗滌4次。使用多通道移液器或自動(dòng)洗板機(jī)洗板，每孔加入洗滌緩沖液（300μl）。每個(gè)步驟中去除液體對(duì)于良好的性能是至關(guān)重要的。洗完后，通過(guò)吸取或傾析清除任何剩余的洗滌緩沖液。倒置板并用干凈的吸水紙吸干印跡。
●每孔加入100μl1X制備的生物素化抗體（試劑制備步驟6）。在室溫下溫和振蕩孵育1小時(shí)。
●棄去溶液。重復(fù)洗滌，如步驟4。
●加入100μl制備的鏈霉親和素溶液（見(jiàn)試劑制備步驟7）。在室溫下溫和搖動(dòng)孵育45分鐘。
●棄去溶液。 重復(fù)洗滌，如步驟4。
●向每個(gè)孔中加入100μlTMB一步底物試劑（項(xiàng)目H）。在室溫下在黑暗中輕輕振蕩孵育30分鐘。
●向每個(gè)孔中加入50μl終止液（項(xiàng)目I）。 立即讀取450 nm處吸光度值。

大鼠IFN-γ檢測(cè)試劑盒存儲(chǔ)

大鼠IFN-γ細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒可在-20°C下保存，從裝運(yùn)之日起存放可長(zhǎng)達(dá)1年。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。 試劑盒可以在4℃下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)6個(gè)月。 對(duì)于更長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存時(shí)，建議儲(chǔ)存在-80°C。 該試劑盒組分見(jiàn)下表

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