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C反應(yīng)蛋白超敏檢測ELISA試劑盒
德國DRG進口原裝貨號：EIA3954 規(guī)格96T
德國DRG中國*代理商深圳科潤達生物工程有限公司

用于體外診斷用
存儲于2 °C – 8 °C.
 
產(chǎn)品名
C反應(yīng)蛋白超敏檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
 
預(yù)期用途
此超敏CRP ELISA檢測試劑盒能用于人血清中C反應(yīng)蛋白的定量檢測．檢測C反應(yīng)蛋白可用于感染，組織損傷，炎癥和相關(guān)疾病的輔助檢測．
 
簡介
C反應(yīng)蛋白于1930年由Tilet和Francis在肺炎患者血清中鑒別出來，因其能結(jié)合和沉淀肺炎球菌C多糖而得名．它是一種分子量約為110,000－140，000道爾頓，由5個相同亞單位（由非共價鍵結(jié)合成的循環(huán)五聚物）組成的α球蛋白．C反應(yīng)蛋白在肝臟中合成，正常情況下血清和血漿含量很少，濃度約為0.3 mg/dl．它具有廣泛的生理學(xué)意義，但與其它免疫球蛋白具有幾種相似的功理，主要表現(xiàn)為機體防御．
C反應(yīng)蛋白是種急性期蛋白，在多種疾病的非特異性反應(yīng)過程中（包括革蘭氏陽性和革蘭氏陰性微生物感染，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，腹膿腫，膽管發(fā)炎等），患者血清和血漿中的含量水平都會劇增．在格林-巴利綜合征，多發(fā)性硬化，特定的病毒感染，肺結(jié)核，急性傳染性肝炎，多種神經(jīng)和炎癥疾病，灼傷和外科術(shù)后的病人體內(nèi)也能觀察到高濃度的C反應(yīng)蛋白．
盡管檢測血清中C反應(yīng)蛋白上升的濃度不能作為特定疾病的指標，但對于多種炎癥的病發(fā)研究是很有意義的．急性組織損傷后，在24－48小時內(nèi)血清或血漿中C反應(yīng)蛋白的濃度就迅速上升，急性期間達到（大約上升1000倍），創(chuàng)傷或炎癥治療后，其濃度立即下降．人血清或血漿中C反應(yīng)蛋白的濃度，在降至正常水平前會持續(xù)幾天的上升．檢測C反應(yīng)蛋白可作為炎癥病變過程的標記物，甚至比紅細胞沉降速度這種指標更可靠和靈敏．因為紅細胞沉降速度會受到非炎癥進程機體的生理變化的影響．常見檢測C反應(yīng)蛋白的方法包括：乳膠凝集試驗，比濁法，放射免疫擴散法．但這些方法的靈敏度都很低，而ELISA方法的靈敏度和特異性更高．
由于上升濃度的C反應(yīng)蛋白往往與病理改變存在緊密，故也可作為診斷，治療，炎癥監(jiān)測和相關(guān)病癥的有效輔助工具．此外，通過高靈敏度的方法檢測C 反應(yīng)蛋白也可增強其它心肌標記物（如肌紅蛋白，肌鈣蛋白I和T）的預(yù)測價值，有利于心血管和外圍血管疾病的風(fēng)險評估．由于C反應(yīng)蛋白值的上升為非特異性，所以需結(jié)合患者病歷評估與先前的檢測值作對比進行分析．
 
 
實驗原理
超敏CRP檢測試劑盒基于酶免法原理，試驗中采用了抗CRP的特異性單克隆抗體，包被板上包被了抗CRP抗體鼠單抗，，HRP標記的抗CRP抗體羊抗，試驗樣本與這兩個抗體反應(yīng)，樣本中CRP分子在固相抗體和酶聯(lián)物抗體之間，室溫下45min孵育過后，洗板，除去未結(jié)合的標記抗體，TMB底物液加入，孵育20min，變成藍色，以1N HCL終止顏色反應(yīng)，變成黃色
樣本中的CRP濃度與顏色強度成正比，450nm處檢測吸光值
試劑盒組成
 

1. 包被板，96孔，包被有抗CRP小鼠單抗
2. 標準品，1.0ml/支，濃度分別為：0；0.005；0.010；0.025；0.050；0.100mg/L，，　　　　含防腐劑，即用
3. 樣本稀釋液，50ml/支，含磷酸緩沖液-BSA溶液，含防腐劑
4. 酶聯(lián)物，12ml/支，含HRP標記的抗CRP羊抗，含防腐劑
5. TMB底物液，11ml/瓶，TMB
6. 終止液，11ml/瓶，1N 鹽酸

實驗所需器材但試劑盒未提供
 

1. 移液器：5ul；10ul；50ul；100ul；1.0ml
2. 一次性槍頭
3. 酶標儀
4. 混合器或相關(guān)儀器
5. 吸水紙
6. 坐標紙

貯存條件
 

1. 未開封的試劑盒可在2-8℃下保存至有效期
2. 保持微孔板保存于含有干燥劑的密封袋內(nèi)，盡可能避免接觸潮濕的空氣

試劑準備
 

1. 實驗前將所有試劑平衡至室溫（18 °C – 25 °C）
2. 實驗前病人血清應(yīng)稀釋100倍，如5ul的血清+495ul的樣本稀釋液；

標準品不需要稀釋
 

1. 稀釋后的樣本CRP濃度仍超過了10mg/L時，應(yīng)進一步進行稀釋（10倍）（如10ul 已100倍稀釋的樣本+90ul樣本稀釋液）

樣本采集與準備
 

1. 此試驗需使用血清樣本
2. 標準靜脈采血技術(shù)采集樣本，采集后60min內(nèi)分離出血清
3. 24小時內(nèi)樣本不使用的話，需貯存于-20℃或更低，可保存6個月
4. 避免使用溶血（鮮紅色），脂血（乳白色）或渾濁樣本（離心后）
5. 樣本不能反復(fù)凍融，不要將樣本貯存于無霜冷凍機內(nèi)，凍存的樣本和渾濁樣本或含有其他微粒物質(zhì)的樣本，在使用前都需要進行離心

操作注意事項
 

1. 加樣建議（單通道或多通道）：所有標準品，樣本和質(zhì)控加樣應(yīng)在3min之內(nèi)完成
2. 所有標準品，樣本和質(zhì)控都做雙孔檢測
3. 加入終止液后15min內(nèi)讀數(shù)

實驗步驟
 

1. 實驗前病人樣本和質(zhì)控稀釋100倍，見“試劑準備”；不要稀釋標準品
2. 將實驗所需包被板固定于板架上
3. 將10ul的標準品，稀釋的樣本，稀釋的質(zhì)控加于相應(yīng)孔內(nèi)
4. 每孔加100ul的CRP酶聯(lián)物
5. 充分混合30秒，充分混合相當(dāng)重要
6. 室溫下（18-25℃）孵育45min
7. 迅速棄去反應(yīng)液，用去離子水或雙蒸水洗板5次，不要使用自來水；
8. 吸水紙上拍干，去除殘留液滴
9. 每孔加100ul的TMB底物液，輕輕混合5秒
10. 室溫下孵育20min
11. 每孔加終止液100ul
12. 輕輕混合30秒，確保藍色溶液全轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色
13. 15min內(nèi)酶標儀上讀數(shù)（450nm）

結(jié)果計算
 

1. 計算各標準品，樣本的平均OD值
2. 以標準品的濃度為X軸，OD值為Y值，繪制標準曲線
3. 樣本濃度值可從標準曲線上直接得到；也可使用相關(guān)數(shù)據(jù)處理軟件得到實驗結(jié)果
4. 所得樣本濃度值還需乘以稀釋因子100，而得到zui終結(jié)果
5. 若樣本濃度高于10mg/L，需進一步稀釋（10倍），所得結(jié)果需乘以1000
6. 注意：病人樣本CRP濃度低于0.1mg/L的記錄為＜0.1mg/LCRP

標準曲線示范
 
以下為以CRP的濃度為X軸，相應(yīng)的吸光值為Y軸的典型標準曲線．
提示：此標準曲線僅供演示說明用，不能用于未知樣品的計算．每個實驗室在每次實驗都應(yīng)建立自已的數(shù)據(jù)和標準曲線．

期望值
建議每個實驗室都應(yīng)在健康人群的基礎(chǔ)上建立自己的正常值范圍；以下是出版的文獻中提及的健康人群的CRP值
正常血清：0.01—0.35mg/L
成人血清：0.068—8.2mg/L
 
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